Secuenciación molecular

Métodos de Maxam y Gilbert y de Sanger

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Test 1 sobre métodos de secuenciación de ácidos nucleicos: método de Maxam y Gilbert y método original de Sanger.

Conocimientos requeridos:

Secuenciación de Maxam y Gilbert.
Secuenciación clásica de Sanger (diseño original).
Conceptos, fases e interpretación de los resultados.

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Pregunta 1

Secuenciación:

Proceso de determinar la secuencia de nucleótidos de una molécula de ácidos nucleicos (ADN o ARN).

Se obtiene una cadena con las iniciales de las bases nitrogenadas de la cadena de ácidos nucleicos en sentido 5'→3'.

Ambas respuestas.

Pregunta 2

Se modifican las bases nitrogenadas en 4 tubos distintos y, posteriormente, se hidrolizan las cadenas:

Método de Sanger.

Método de Maxam y Gilbert.

Ambas respuestas.

Pregunta 3

Piperidina:

Fluoróforo que tiñe la base nitrogenada modificada.

Rompe la cadena a nivel de la base nitrogenada modificada.

Es un ácido débil.

Pregunta 4

Método de Sanger:

Se modifican las bases nitrogenadas de la cadena.

Se utilizan ddNTP.

Se utiliza piperidina.

Pregunta 5

Extremo que generalmente se marca radiactivamente en el método de Maxam y Gilbert:

5'.

3'.

En Maxam y Gilbert no se marca ningún extremo.

Pregunta 6

Bases que se modifican en los 4 tubos en el método de Maxam y Gilbert:

Adenina, guanina, citosina y timina (cada una en un tubo).

Adenina, timina, purina y pirimidina (cada una en un tubo).

Púrica, pirimidínica, guanina y citosina (cada una en un tubo).

Pregunta 7

Electroforesis en el método de Maxam y Gilbert:

En gel de agarosa.

En condiciones desnaturalizantes.

En gel de poliacrilamida y en condiciones desnaturalizantes.

Pregunta 8

Electroforesis en el método de Maxam y Gilbert:

Se mezclan los cuatro tubos y la electroforesis es con una única calle.

Se mezclan los cuatro tubos y la electroforesis es en gel de agarosa con una única calle.

No se mezclan los tubos y la electroforesis es con cuatro calles.

Pregunta 9

Permite secuenciar fragmentos de hasta 800 nucleótidos:

Método de Maxam y Gilbert.

Método de Sanger.

Ambas respuestas.

Pregunta 10

Se puede determinar la secuencia desde la primera base:

Método de Maxam y Gilbert.

Método de Sanger.

Ambas respuestas.

Pregunta 11

Si se marca el extremo 5' con el isopo ³²P en el método de Maxam y Gilbert, entonces:

En el revelado de la electroforesis, la secuencia leída de abajo a arriba corresponde a la secuencia 3'→5'.

En el revelado de la electroforesis (autorradiografía) se muestran sólo los fragmentos marcados.

Ambas son correctas.

Pregunta 12

Selecciona la FALSA:

El método de Maxam y Gilbert no requiere amplificación o clonación del fragmento a secuenciar.

El método de Sanger permite conocer la secuencia desde el primer nucleótido.

El método de Maxam y Gilbert requiere el uso de productos peligrosos.

Pregunta 13

Método de Sanger:

Se basa en el uso de didesoxinucleótidos.

Se basa en la replicación de una molécula de ADN mediante ADN-polimerasa.

Ambas respuestas.

Pregunta 14

ddNTP:

Nucleótido que carece del grupo hidroxilo en el carbono 3'.

Nucleótido que carece del grupo fosfato en su carbono 3'.

Nucleótido que carece del grupo fosfato en su carbono 5'.

Pregunta 15

Proceso de síntesis en el método de Sanger:

Se usa una mayor proporción de ddNTP que de dNTP.

La incorporación de un ddNTP impide que continúe la elongación de la cadena.

Ambas respuestas.

Pregunta 16

Método de Sanger:

Se marca radiactivamente el cebador en su extremo 5'.

Se marcan radiactivamente los ddNTP con ³²P.

Ambas opciones son válidas.

Pregunta 17

Respecto al método de Sanger, selecciona la FALSA:

Se utilizan marcadores radiactivos.

Se utilizan ddNTP en lugar de dNTP.

Se basa en el uso de nucleótidos terminadores.

Pregunta 18

Método de Maxam y Gilbert. Mediante marcado radiactivo del extremo 5' se obtiene la siguiente secuencia, leída de abajo a arriba tras revelar la electroforesis: ATTAC. ¿Cuál es la secuencia de la hebra de partida?

5'-ATTAC-3'.

5'-GTAAT-3'.

5'-TAATG-3'.

Pregunta 19

La hebra a secuenciar se introduce en 4 tubos:

Método de Sanger.

Método de Maxam y Gilbert.

Métodos de Sanger y de Maxam y Gilbert.

Pregunta 20

Fragmentos sintetizados en los tubos en el método de Sanger:

Todos los fragmentos de un mismo tubo tienen la misma longitud.

Todos los fragmentos de un mismo tubo tienen un cebador en 5' y el mismo ddNTP en 3'.

Todos los fragmentos de un mismo tubo tienen el mismo ddNTP en 3', pero no tienen un cebador en 5'.

Pregunta 21

Fragmentos de los tubos del método de Maxam y Gilbert:

Hay fragmentos de distintas longitudes en un mismo tubo, todos ellos marcados radiactivamente.

Todos los fragmentos de un mismo tubo tienen el mismo dNTP en 3'.

Tras la escisión, en algunos tubos puede haber fragmentos con la misma secuencia.

Pregunta 22

Método de Sanger. Mediante marcado radiactivo del extremo 5' se obtiene la siguiente secuencia, leída de abajo a arriba tras revelar la electroforesis: ATTAC. ¿Cuál es la secuencia de la hebra de partida?

5'-ATTAC-3'.

5'-GTAAT-3'.

5'-TAATG-3'.

Pregunta 23

Selecciona la correcta:

El método de Maxam y Gilbert de secuenciación es un método químico, mientras que el método de Sanger es un método enzimático.

El método de Maxam y Gilbert permite secuenciar fragmentos de mayor longitud que el método de Sanger.

Ambas son correctas.

Pregunta 24

Selecciona la FALSA:

La cantidad inicial de ADN es un factor limitante en el método de Sanger.

El método de Maxam y Gilbert utiliza iniciadores marcados radiactivamente.

El método de Sanger sólo permite la secuenciación a partir de la base número 10-20.

Pregunta 25

La electroforesis se realiza en gel de poliacrilamida y en condiciones de desnaturalización:

Método de Maxam y Gilbert.

Método de Sanger.

Ambas respuestas.

Pregunta 26

Electroforesis en gel de poliacrilamida 6-8%, urea 6-8M y 40-50°C:

Método de Maxam y Gilbert.

Método de Sanger.

Ambas respuestas.

Pregunta 27

Método de Maxam y Gilbert:

Método de degradación química.

Método enzimático.

Método terminador de cadena.

Pregunta 28

Método de Sanger:

Método químico.

Método terminador de cadena.

Método terminador de cadena reversible.

Pregunta 29

Selecciona la correcta:

El método de Maxam y Gilbert fue el primer método de secuenciación.

El método de Sanger se basa en el mismo sistema que usan las células para replicar su propio ADN.

Ambas respuestas.

Pregunta 30

Resultado obtenido mediante Maxam y Gilbert:

secuenciación molecular

¿Cuál es la secuencia de ADN de la hebra inicial?

5'-CTGACGC-3'

5'-GACTGCG -3'

5'-AGTCACG-3'

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