Secuenciación molecular

Secuenciación de Sanger (1G)

Test online

Test 2 sobre métodos de secuenciación de ácidos nucleicos: secuenciación automática de primera generación (1G) o secuenciación de Sanger.

Conocimientos requeridos:

Secuenciación de Sanger.
Secuenciación con cebador fluorescente.
Secuenciación con ddNTP fluorescente.
Fases.

Tests relacionados:

Secuenciación de Maxam y Gilbert y secuenciación original de Sanger

Pregunta 1

Secuenciación automática de primera generación:

Se basa en el método de terminación de cadena de Sanger.

Usa cuatro fluoróforos distintos como marcadores.

Ambas respuestas.

Pregunta 2

Secuenciación automática de primera generación. Selecciona la FALSA:

Se realizan dos PCR con dos pares de cebadores distintos, uno para amplificar y otro para secuenciar.

También se denomina secuenciación Sanger.

Se pueden usar cebadores fluorescentes o ddNTP marcados con fluoróforos distintos.

Pregunta 3

Secuenciación de Sanger con cebador fluorescente:

En cada uno de los tubos se utiliza un cebador distinto y cada cebador está marcado con un fluoróforo distinto.

En cada tubo se añade una mezcla con los cuatro tipos de ddNTP marcados con fluoróforos distintos.

En todos los tubos se usa el mismo cebador, pero marcado con fluoróforos distintos.

Pregunta 4

Secuenciación de Sanger con ddNTP fluorescentes:

Se utiliza un único tubo.

En cada uno de los 4 tubos se introduce un único ddNTP y los ddNTP se marcan con fluoróforos distintos.

Además de los ddNTP fluorescentes, se utiliza un cebador fluorescente.

Pregunta 5

Electroforesis del secuenciador:

Puede ser en gel de poliacrilamida o capilar.

La electroforesis en gel suele tener una velocidad mayor que la electroforesis capilar.

Ambas respuestas.

Pregunta 6

Electroferograma:

Representación gráfica que proporciona el secuenciador automático tras analizar la electroforesis.

A cada una de las bases le corresponde un color distinto.

Ambas respuestas.

Pregunta 7

Se realizan cuatro reacciones PCR:

Cuando se marca el cebador.

Cuando se marcan los ddNTP.

Ambas respuestas.

Pregunta 8

Si se realizan dos PCR acopladas (amplificación y secuenciación), entonces:

Se usa el mismo par de cebadores en ambas PCR.

Se usa un par de cebadores distinto en cada PCR.

Se usa un par de cebadores en la primera PCR y la segunda PCR se realiza solo con uno de los dos cebadores anteriores.

Pregunta 9

Selecciona la FALSA:

Requiere alta cantidad de ADN inicial.

Se puede usar ADN inicial bicatenario.

La lectura del electroferograma depende de si se ha empleado cebador F o R.

Pregunta 10

Método más utilizado en la secuenciación Sanger:

Terminador fluorescente.

Cebador fluorescente.

Cebador fluorescente con terminador fluorescente.

Pregunta 11

Tamaño máximo de las cadenas que se pueden secuenciar en una misma reacción:

Hasta 150 bases.

Hasta 300 bases.

Hasta 1000 bases.

Pregunta 12

Secuenciador:

Si se usan ddNTP marcados, se carga un único tubo en el secuenciador.

Si se usa cebador marcado, se cargan 4 tubos por separado en el secuenciador.

Independientemente del marcado, en el secuenciador sólo se carga un tubo.

Pregunta 13

Respecto a la secuenciación de Sanger, señala la FALSA:

Es más sensible que el método de secuenciación original de Sanger.

Es un método de secuenciación por degradación química.

Combinando con la clonación, permite la secuenciación a gran escala.

Pregunta 14

Selecciona la FALSA:

Los fragmentos tienen un ddNTP en su extremo 3'.

Los fragmentos tienen un cebador en su extremo 3'.

Los fragmentos tienen un ddNTP en su extremo 3' cuando se usa un cebador R.

Pregunta 15

Selecciona la FALSA:

El método original de secuenciación de Sanger requiere autorradiografía.

La secuenciación de Sanger utiliza un secuenciador láser para detectar fluoróforos.

La secuenciación de Sanger requiere autorradiografía.

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