Técnicas de PCR

Test 1

Test online

Test sobre conceptos básicos de la PCR.

Conocimientos requeridos:

Tipos de PCR.
Características de los cebadores.
ADN polimerasas.
Fases del ciclo básico.

Otros tests de PCR:

Pregunta 1

La PCR múltiple…

Amplifica fragmentos de ARN.

Cuantifica la concentración de una molécula concreta.

Amplifica varios fragmentos distintos en una única reacción.

Pregunta 2

La RT-PCR…

Amplifica fragmentos de ARN.

Cuantifica la concentración de una molécula concreta.

Amplifica varios fragmentos distintos en una única reacción.

Pregunta 3

Selecciona la verdadera:

Como técnica de amplificación, la PCR es más rápida que las técnicas de clonación.

Como técnica de detección, la PCR requiere una cantidad de muestra mucho mayor que las técnicas de hibridación.

Ambas son verdaderas.

Pregunta 4

Selecciona la verdadera:

La PCR es muy sensible.

La PCR es resistente a posibles contaminaciones.

Ambas son verdaderas.

Pregunta 5

Selecciona la FALSA:

Los cebadores de más de 30 bases dan especificidad, pero disminuyen el rendimiento de la reacción.

Los cebadores con menos de 15 bases carecen de sensibilidad.

Los cebadores con mayor porcentaje de A/T proporcionan los mejores resultados.

Pregunta 6

Selecciona la correcta:

Es aconsejable utilizar cebadores con menos de 15 bases.

Es aconsejable utilizar cebadores con secuencias complementarias intra e intermoleculares.

Es aconsejable utilizar cebadores cuya diferencia de T_m sea inferior a 5°C.

Pregunta 7

Selecciona la FALSA:

Las secuencias complementarias intramoleculares pueden dar lugar a la autodimerización.

Las secuencias complementarias intermoleculares entre ambos cebadores no afecta al rendimiento de la PCR.

La ausencia de complementariedad entre los cebadores es especialmente importante en los extremos 3' de estos.

Pregunta 8

Selecciona la FALSA:

La ADN polimerasa no puede iniciar la replicación si el cebador no se une completamente al ADN molde.

Los mejores resultados se obtienen con un contenido del G/C entre el 40% y el 60%.

Se recomienda que el extremo 3' del cebador no contenga secuencias de tres o más G/C seguidas.

Pregunta 9

Sobre las ADN polimerasas termoestables. Selecciona la FALSA:

Son enzimas aisladas de arqueobacterias extremófilas.

Tienen actividad polimerasa en tiempos prolongados a temperatura de 95°C.

Puede catalizar la incorporación de nucleótidos en dirección 3'→5' y 5'→3'.

Pregunta 10

Para una alta fidelidad de replicación, se recomienda el uso de ADN polimerasas…

Con actividad exonucleasa 5'→3' y sin actividad exonucleasa 3'→5'.

Con actividad exonucleasa 5'→3' y 3'→5'.

Con actividad transcriptasa inversa.

Pregunta 11

La Taq ADN polimerasa…

Tiene actividad exonucleasa 5'→3'.

Tiene actividad exonucleasa 3'→5'.

Tiene actividad transcriptasa inversa.

Pregunta 12

Se llama annealing a…

La síntesis de la secuencia ADN diana.

La hibridación de los cebadores al ADN molde.

La elongación de los cebadores mediante la ADN polimerasa.

Pregunta 13

El cebador que se une a la hebra molde que tiene dirección 5'→3' es el…

Cebador F o forward.

Cebador R o reverse.

Ninguna de las anteriores.

Pregunta 14

El orden de las fases de un ciclo de PCR es…

Annealing, hibridación y extensión.

Extensión, annealing y renaturalización.

Desnaturalización, hibridación y extensión.

Pregunta 15

Fase que se realiza a una temperatura de T_m ± 5°C, siendo T_m la temperatura de fusión de los cebadores:

Desnaturalización.

Hibridación.

Extensión.

Pregunta 16

Fase que suele realizarse a 94-95°C:

Desnaturalización.

Hibridación.

Annealing.

Pregunta 17

Fase que se realiza a la temperatura óptima de la ADN polimerasa empleada:

Desnaturalización.

Hibridación.

Extensión.

Pregunta 18

Temperaturas de hibridación más elevadas implican…

Mayor rigurosidad y menor especificidad.

Menor rigurosidad y mayor especificidad.

Mayor rigurosidad y especificidad.

Pregunta 19

Aparecen más productos no deseados si se usa…

Temperaturas de hibridación elevadas.

Temperaturas de hibridación bajas.

No depende de la temperatura de hibridación.

Pregunta 20

Se obtiene un menor rendimiento de la técnica cuando se usan…

Altas temperaturas de hibridación.

Bajas temperaturas de hibridación.

No depende de la temperatura de hibridación.

Pregunta 21

En la siguiente figura se representan las dos hebras complementarias de ADN molde (negro), la pareja de cebadores (rojo) y la secuencia de ADN molde que se quiere amplificar (verde):

Test o examen online sobre las téncicas de PCR (tipos de PCR, cebadores, ADN polimerasas y fases del ciclo básico).

¿Cuál es el extremo x' de los cebadores?

Es el extremo 3'.

Es el extremo 5'.

En un cebador es el extremo es 3' y en el otro es 5'.

Pregunta 22

Selecciona la FALSA:

La ausencia de complementariedad entre los cebadores es especialmente importante en sus extremos 5'.

La temperatura de fusión de los cebadores debería estar entre 52-65°C.

La pareja de cebadores define y delimite la región diana que se quiere amplificar.

Pregunta 23

Selecciona una:

La amplificación de ADN requiere presencia de iones Mg²⁺.

La amplificación de ARN requiere presencia de iones Mn²⁺.

Ambas son correctas.

Pregunta 24

En la siguiente figura se representan dos situaciones de la hibridación del cebador (rojo) a la cadena molde (negro):

Test o examen online sobre las téncicas de PCR (tipos de PCR, cebadores, ADN polimerasas y fases del ciclo básico).

¿En cuál de las situaciones la ADN polimerasa podrá realizar su actividad de elongación?

En la situación A.

En la situación B.

En ninguna de las situaciones.

Pregunta 25

Fase que se realiza habitualmente a una temperatura entre 50°C y 65°C:

Desnaturalización.

Hibridación.

Extensión.

Pregunta 26

El tiempo de la fase de extensión…

Depende de la enzima empleada.

Depende de la longitud del fragmento a amplificar.

Ambas son ciertas.

Pregunta 27

Selecciona la FALSA:

El tiempo estándar de la fase de desnaturalización es de 15-30 segundos.

El tiempo estándar de la fase de hibridación es de 30-60 segundos.

El tiempo estándar de la fase de extensión es de 20-40 minutos.

Pregunta 28

Si se emplea la Taq polimerasa, la temperatura de la fase de extensión es…

55°C.

72°C.

96°C.

Pregunta 29

La velocidad de polimerización de la Taq polimerasa es de alrededor de…

20 nucleótidos por segundo.

60 nucleótidos por segundo.

120 nucleótidos por segundo.

Pregunta 30

A temperaturas de hibridación menores que la T_m de los cebadores, …

Se obtiene mayor especificidad.

Disminuyen los productos no deseados.

Los cebadores hibridan más eficientemente.

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